Effect of Different Time Interventions of <italic style="font-style: italic">Yangxin Tongmai Formula</italic> （养心通脉方） on DNA Methylation in Rat Models of Premature Coronary Heart Disease with Blood Stasis Syndrome

CHEN Xing; YU Zixuan; ZHANG Shumeng; LIU Yanjuan; DENG Shuangyou; WANG Ying; CHEN Lingli; LI Jie

doi:10.13288/j.11-2166/r.2025.11.013

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Effect of Different Time Interventions of Yangxin Tongmai Formula （养心通脉方） on DNA Methylation in Rat Models of Premature Coronary Heart Disease with Blood Stasis Syndrome

更新时间：2025-05-28

- Effect of Different Time Interventions of Yangxin Tongmai Formula （养心通脉方） on DNA Methylation in Rat Models of Premature Coronary Heart Disease with Blood Stasis Syndrome
- Journal of Traditional Chinese Medicine Vol. 66, Issue 11, Pages: 1165-1173(2025)
- 作者机构：
  
  1.湖南中医药大学中医诊断研究所，湖南省长沙市岳麓区含浦科教园学士路 300号，410208
  2.湖南中医药大学中医学院
  3.湖南中医药大学医学院
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2025.11.013
  CLC：
- Received：20 January 2025，
  
  Revised：2025-03-23，
  
  Published：02 June 2025
- 稿件说明：
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陈杏,于子璇,张书萌等.养心通脉方不同时间干预对早发冠心病血瘀证模型大鼠DNA甲基化的影响[J].中医杂志,2025,66(11):1165-1173.

CHEN Xing,YU Zixuan,ZHANG Shumeng,et al.Effect of Different Time Interventions of Yangxin Tongmai Formula （养心通脉方） on DNA Methylation in Rat Models of Premature Coronary Heart Disease with Blood Stasis Syndrome[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2025,66(11):1165-1173.
陈杏,于子璇,张书萌等.养心通脉方不同时间干预对早发冠心病血瘀证模型大鼠DNA甲基化的影响[J].中医杂志,2025,66(11):1165-1173. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2025.11.013.

CHEN Xing,YU Zixuan,ZHANG Shumeng,et al.Effect of Different Time Interventions of Yangxin Tongmai Formula （养心通脉方） on DNA Methylation in Rat Models of Premature Coronary Heart Disease with Blood Stasis Syndrome[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2025,66(11):1165-1173. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2025.11.013.

摘要

目的

观察养心通脉方子午流注法干预对早发冠心病（PCHD）血瘀证模型大鼠的效果，并从DNA甲基化差异基因表达角度探讨其作用机制。

方法

1）设空白组、造模组、养心通脉方组SD大鼠各3只，造模组、养心通脉方组大鼠以高脂饲料持续饲养+维生素D3灌胃+盐酸异丙肾上腺素皮下注射方法构建PCHD血瘀证大鼠模型。造模成功后养心通脉方组大鼠以养心通脉方溶液18 g/（kg·d）灌胃，空白组和造模组大鼠以0.9%氯化钠溶液4 ml/（kg·d）灌胃，3周后采集各组大鼠血清样本进行DNA甲基化测序，筛选相关DNA甲基化差异基因。2）另将PCHD血瘀证造模成功的大鼠随机分为模型组、养心通脉方子午流注干预组［养心通脉方溶液18 g/（kg·d）分别于心经时段（12：00）和心包经时段（20：00）两次灌胃］、养心通脉方对照组［养心通脉方溶液18 g/（kg·d）分别于8：00和18：00两次灌胃］和阿托伐他汀钙组［阿托伐他汀钙片溶液1.8 mg/（kg·d）灌胃，时间同养心通脉方对照组］，另设空白对照组，每组8只。模型组和空白对照组以0.9%氯化钠溶液4 ml/（kg·d）灌胃，时间同养心通脉方对照组。灌胃3周后，检测各组大鼠血脂［包括总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）］水平，大鼠心肌组织及胸主动脉HE染色观察病理形态学改变，检测血清炎症指标［肿瘤坏死因子α（TNF-α）、脂多糖（LPS）、白细胞介素10（IL-10）］水平，免疫沉淀-实时荧光定量PCR法检测心脏组织筛选差异基因相对表达量。

结果

1）筛选出差异甲基化区域的基因为钙调蛋白2（

Calm2

）、钙电压门控通道亚基α1s（

Cacna1s

）、磷脂酶Cβ1（

Plcb1

）。2）与空白对照组比较，模型组大鼠TC、LDL、TNF-α、LPS含量均升高，HDL、IL-10含量降低（

＜0.05或

＜0.01）；HE染色显示心肌纤维明显肿胀，并伴有大量炎症细胞浸润，主动脉血管内壁增厚，内壁损伤，可见大量脂质胆固醇结晶，炎症细胞浸润明显。与模型组比较，养心通脉方子午流注干预组、养心通脉方对照组、阿托伐他汀钙组大鼠TC、LDL、TNF-α、LPS含量均降低，HDL、IL-10含量均升高（

＜0.05），心肌组织损伤改善，炎性浸润减少，胸主动脉内膜损伤改善，脂质浸润减少。与养心通脉方对照组比较，养心通脉方子午流注干预组LDL、TNF-α、LPS含量降低，IL-10含量升高（

＜0.05）。与模型组比较，养心通脉方对照组和养心通脉方子午流注干预组

Calm2、Plcb1

基因相对表达量降低、

Cacna1s

基因相对表达量升高（

＜0.05）；与养心通脉方对照组比较，养心通脉方子午流注干预组

Calm2

基因相对表达量降低、

Cacna1s

基因相对表达量升高（

＜0.05）。

结论

养心通脉方于心经（12：00）、心包经（20：00）时段干预更能有效改善PCHD血瘀证模型大鼠血脂水平、抑制炎症反应和改善心肌组织损伤，

Calm2、Cacna1s

基因可能是养心通脉方干预PCHD血瘀证的关键靶点。

Abstract

Objective

To observe the effect of

Yangxin Tongmai Formula

（养心通脉方） by midnight-noon ebb-flow administration method for rat models of premature coronary heart disease （PCHD） with blood stasis syndrome， and to explore the possible mechanism of action from the perspective of DNA methylation differential gene expression.

Methods

There were 3 SD rats in each of the blank group， model group and

Yangxin Tongmai Formula

group， and the rats in the model group and

Yangxin Tongmai Formula

group were fed with high-fat chow plus vitamin D3 by gavage plus isoproterenol hydrochloride by subcutaneous injection to construct rat models of PCHD with blood stasis syndrome. After successful modelling， rats in

Yangxin Tongmai Formula

group were gavaged with 18 g/（kg‧d） of

Yangxin Tongmai Formula

， and rats in blank group and the model group were gavaged with 4 ml/（kg‧d） of 0.9% NaCl solution， and serum samples of rats in each group were collected for DNA methylation sequencing after 3 weeks to screen for the relevant DNA methylation differentiation genes. In addition， rats with successful modelling of PCHD with blood stasis were randomly divided into model group，

Yangxin Tongmai Formula

with midnight-noon ebb-flow administration method group ［18 g/（kg‧d） of

Yangxin Tongmai Formula

was gavaged twice in the heart channel period （12：00） and pericardium channel period （20：00）］， the

Yangxin Tongmai Formula

control group ［18 g/（kg‧d） of

Yangxin Tongmai Formula

was gavaged twice at 8：00 and 18：00］ and the Atorvastatin Calcium group ［atorvastatin calcium tablets solution 1.8 mg/（kg‧d） at the same intervention time as that in

Yangxin Tongmai Formula

control group］， and set up a blank group of 8 rats in each group. The model group and blank group were gavaged with 0.9% NaCl solution 4 ml/（kg‧d） for the same time as the

Yangxin Tongmai Formula

control group. After 3 weeks of gavage， the blood lipids ［including total cholesterol （TC）， low-density lipoprotein （LDL）， high-density lipoprotein （HDL）］ levels of rats in each group were detected； the HE staining of myocardial tissues and thoracic aorta was used to observe the pathomorphological changes； the levels of serum inflammation inde

xes ［tumour necrosis factor alpha （TNF-alpha）， lipopolysaccharide （LPS）， and interleukin 10 （IL-10）］ were detected； immunoprecipitation-realtime fluorescence quantitative PCR was used to detect the relative expression of cardiac tissue screening differential genes.

Results

The genes screened for differentially methylated regions were calmodulin 2 （

Calm2

）， calcium voltage-gated channel subunit α1s （

Cacna1s

）， and phospholipase Cβ1 （

Plcb1

）. Compared with the blank group， rats in the model group showed elevated levels of TC， LDL， TNF-α and LPS， and decreased levels of HDL and IL-10 （

＜0.05 or

＜0.01）； HE staining showed obvious swelling of myocardial fibres， accompanied by a large number of inflammatory cell infiltration， and thickening of the inner wall of the aortic vessels with internal wall damage， which was visible as a large number of lipid cholesterol crystals and obvious inflammatory cell infiltration. Compared with the model group， the TC， LDL， TNF-α and LPS contents of rats in the

Yangxin Tongmai Formula

with midnight-noon ebb-flow administration method group， the

Yangxin Tongmai Formula

control group， and the atorvastatin calcium group all reduced， and the contents of HDL and IL-10 all elevated （

＜0.05）， with the improvement of myocardial tissue damage and the reduction of inflammatory infiltration， and the improvement of the damage of the inner lining of the thoracic aorta and the reduction of lipid infiltration. Compared with

Yangxin Tongmai Formula

control group， LDL， TNF-α and LPS contents reduced， and IL-10 contents increased in the midnight-noon ebb-flow administration method group （

＜0.05）. Compared with the model group， the relative expression of

Calm2

and

Plcb1

genes decreased and the relative expression of

Cacna1s

gene increased in

Yangxin Tongmai Formula

control group and the midnight-noon ebb-flow administration method group （

＜0.05）； compared with the

Yangxin Tongmai Formula

control group， the relative expression of

Calm2

gene decreased and the relative expression of

Cacna1s

gene increased in the midnight-noon ebb-flow administration method group （

＜0.05）.

Conclusion

The intervention of

Yangxin Tongmai Formula

in the heart channel period （12：00） and pericardium channel period （20：00） was more effective in improving the blood lipid level， inhibiting inflammation， and improving myocardial tissue damage in rats of PCHD with blood stasis syndrome， and

Calm2

and

Cacna1s

genes may be the key targets of

Yangxin Tongmai Formula

in intervening the blood stasis syndrome of PCHD.

关键词

Keywords

references

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