Effects of <italic style="font-style: italic">Qingre Huoxue Formulation</italic> （清热活血方） on H3K18 Lactylation and the JAK2/STAT3 Signaling Pathway in Rats with Collagen-Induced Arthritis

YANG Yue; ZHANG Xieyu; ZHANG Xinwen; WEI Guangcheng; SHI Jinjie; LI Xiaoxu; ZHAO Jiahe; CAO Wei

doi:10.13288/j.11-2166/r.2025.19.013

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Effects of Qingre Huoxue Formulation （清热活血方） on H3K18 Lactylation and the JAK2/STAT3 Signaling Pathway in Rats with Collagen-Induced Arthritis

更新时间：2025-09-26

- Effects of Qingre Huoxue Formulation （清热活血方） on H3K18 Lactylation and the JAK2/STAT3 Signaling Pathway in Rats with Collagen-Induced Arthritis
  增强出版
- Journal of Traditional Chinese Medicine Vol. 66, Issue 19, Pages: 2045-2051(2025)
- 作者机构：
  
  中国中医科学院望京医院，北京市朝阳区中环南路6号，100102
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2025.19.013
  CLC：
- Received：11 March 2025，
  
  Revised：2025-06-24，
  
  Published：02 October 2025
- 稿件说明：
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杨越,张解玉,张馨文等.清热活血方对胶原诱导性关节炎模型大鼠H3K18la及JAK2/STAT3信号通路的影响[J].中医杂志,2025,66(19):2045-2051.

YANG Yue,ZHANG Xieyu,ZHANG Xinwen,et al.Effects of Qingre Huoxue Formulation （清热活血方） on H3K18 Lactylation and the JAK2/STAT3 Signaling Pathway in Rats with Collagen-Induced Arthritis[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2025,66(19):2045-2051.
杨越,张解玉,张馨文等.清热活血方对胶原诱导性关节炎模型大鼠H3K18la及JAK2/STAT3信号通路的影响[J].中医杂志,2025,66(19):2045-2051. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2025.19.013.

YANG Yue,ZHANG Xieyu,ZHANG Xinwen,et al.Effects of Qingre Huoxue Formulation （清热活血方） on H3K18 Lactylation and the JAK2/STAT3 Signaling Pathway in Rats with Collagen-Induced Arthritis[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2025,66(19):2045-2051. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2025.19.013.

摘要

目的

基于组蛋白H3的赖氨酸18位乳酸化修饰（H3K18la）与Janus激酶2/信号转导和转录激活子3（JAK2/STAT3）信号通路探讨清热活血方治疗类风湿关节炎可能的作用机制。

方法

24只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、清热活血方组、甲氨蝶呤组，每组6只。除对照组外，其余各组大鼠采用牛Ⅱ型胶原与弗氏不完全佐剂混合制成乳化剂，建立胶原诱导性关节炎大鼠模型。自造模第1天开始，清热活血方组以20 g/（kg·d）清热活血方灌胃，每日1次；甲氨蝶呤组予每周1 mg/kg甲氨蝶呤混悬液灌胃，分别于每周二、四灌胃；对照组、模型组每日以及甲氨蝶呤组非灌胃日均以10 ml/（kg·d）灌胃生理盐水，每日1次。各组均连续灌胃4周。各组分别于第2次免疫后第6、10、14、18、22天进行关节炎指数评分；最后一次灌胃后次日取材，HE染色法检测膝关节滑膜及踝关节病理变化；ELISA法检测大鼠血清中C反应蛋白（CRP）、白细胞介素17（IL-17）水平；微量法检测滑膜中乳酸水平；免疫共沉淀法获取大鼠膝关节滑膜组织中乳酸化蛋白后Western Blot法检测滑膜中H3K18la的水平；Western Blot法检测踝关节磷酸化Janus激酶2（P-JAK2）、磷酸化信号转导和转录激活子3（P-STAT3）蛋白表达水平。

结果

病理结果显示，对照组大鼠滑膜细胞排列整齐，形态正常，无血管增生情况。模型组大鼠滑膜细胞排列杂乱，结构异常，有血管增生与大量炎性细胞浸润；与对照组比较，关节炎指数评分、CRP、IL-17水平显著增高，滑膜中乳酸、H3K18la及关节中P-JAK2、P-STAT3蛋白水平均明显增高（

＜0.01）。与模型组比较，清热活血方组及甲氨蝶呤组大鼠滑膜与关节病理显示炎性损伤减轻，关节炎指数评分、CRP、IL-17水平显著降低，乳酸、H3K18la及P-JAK2、P-STAT3蛋白水平均明显降低（

＜0.05或

＜0.01）。与甲氨蝶呤组比较，清热活血方组在大鼠膝关节及踝关节病理改变相似，以上各指标两组比较差异无显著统计学意义（

＞0.05）。

结论

清热活血方可能通过调节乳酸含量下调H3K18la水平，同时抑制JAK2/STAT3信号通路从而改善胶原诱导性关节炎模型大鼠炎症。

Abstract

Objective

To investigate the potential mechanism of

Qingre Huoxue Formulation

（清热活血方， QHF） in the treatment of rheumatoid arthritis， focusing on histone H3 lysine 18 lactylation （H3K18la） and the janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3 （JAK2/STAT3） signaling pathway.

Methods

Twenty-four male Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group， model group， QHF group， and methotrexate （MTX） with 6 rats in each group. Except for the control group， rats were immunized with bovine type Ⅱ collagen emulsified with incomplete Freund's adjuvant to establish a collagen-induced arthritis （CIA） model. From day 1 of modeling， the QHF group received intragastric administration of 20 g/（kg·d） once daily； the MTX group received intragastric administration of MTX suspension 1 mg/kg weekly on Tuesdays and Thursdays； the control group， model group， and MTX group on non-MTX days were given normal saline 10 ml/（kg·d） once daily. All interventions lasted for 4 weeks. Arthritis index （AI） scores were assessed on days 6， 10， 14， 18， and 22 after the second immunization. After the final gavage， synovial and ankle joint tissues were collected for hematoxylin-eosin （HE） staining to observe pathological changes. Serum C-reactive protein （CRP） and interleukin-17 （IL-17） levels were measured by ELISA； lactate levels in synovium were determined by a micro-method； H3K18la levels in synovial tissue were detected by co-immunoprecipitation and Western Blot； and phosphorylated JAK2 （P-JAK2） and phospho-rylated STAT3 （P-STAT3） expression in ankle joints was measured by Western Blot.

Results

In the control group， synovial cells were well organized and morphologically normal without angiogenesis. In the model group， synovial cells were disordered with abnormal structure， angiogenesis， and massive inflammatory infiltration. Compared with the control group， AI scores， CRP， IL-17， lactate， H3K18la， and P-JAK2/P-STAT3 levels were significantly increased （

＜0.01）. Compared with the model group， both the QHF and MTX groups showed alleviated inflammatory damage in synovial and joint pathology， with significantly reduced AI scores， CRP， IL-17， lactate， H3K18la， and P-JAK2/P-STAT3 protein levels （

＜0.05 or

＜0.01）. No significant differences were found between the QHF and MTX groups across the above indices （

＞0.05）.

Conclusion

QHF may alleviate inflammation in CIA rats by regulating lactate content， downregulating H3K18la， and inhibiting the JAK2/STAT3 signaling pathway.

关键词

Keywords

references

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Effects of Qingre Huoxue Formulation （清热活血方） on H3K18 Lactylation and the JAK2/STAT3 Signaling Pathway in Rats with Collagen-Induced Arthritis

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