龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响

郑雪; 严展鹏; 李堃; 徐婷婷; 王培; 林琳; 朱方石

doi:10.13288/j.11-2166/r.2022.23.013

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龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响

实验研究 | 更新时间：2022-11-28

- 龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响
- Effect of Longchai Formula （龙柴方） Drug-containing Serum Combined with Entecavir on P-glycoprotein and PI3K/AKT Signaling Pathway in HepG2.2.15 Hepatocellular Carcinoma Cells
- 中医杂志 2022年63卷第23期页码：2272-2278
- 作者机构：
  
  1.南京中医药大学第三临床医学院，江苏省南京市红山路十字街100号，210028
  2.江苏省中医药研究院
  3.江苏省中西医结合医院
- 作者简介：
  
  zhufangshi@126. com
- 基金信息：
  
  第三批江苏省老中医药专家学术经验继承工作(20SSC002;20SSC006)
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2022.23.013
  中图分类号：
- 收稿：2022-04-05，
  
  修回：2022-05-22，
  
  纸质出版：2022-12-02
- 稿件说明：
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郑雪,严展鹏,李堃等.龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响[J].中医杂志,2022,63(23):2272-2278.

ZHENG Xue,YAN Zhanpeng,LI Kun,et al.Effect of Longchai Formula （龙柴方） Drug-containing Serum Combined with Entecavir on P-glycoprotein and PI3K/AKT Signaling Pathway in HepG2.2.15 Hepatocellular Carcinoma Cells[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2022,63(23):2272-2278.
郑雪,严展鹏,李堃等.龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响[J].中医杂志,2022,63(23):2272-2278. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2022.23.013.

ZHENG Xue,YAN Zhanpeng,LI Kun,et al.Effect of Longchai Formula （龙柴方） Drug-containing Serum Combined with Entecavir on P-glycoprotein and PI3K/AKT Signaling Pathway in HepG2.2.15 Hepatocellular Carcinoma Cells[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2022,63(23):2272-2278. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2022.23.013.

摘要

目的

观察龙柴方对恩替卡韦抗乙型肝炎病毒（HBV）效果的影响，并探讨可能作用机制。

方法

24只SD大鼠随机分为空白组和龙柴方低、中、高剂量组，每组6只。龙柴方低、中、高剂量组大鼠分别给予龙柴方药液9.84、19.68、39.36 g/（kg·d）灌胃，空白组给予和龙柴方中剂量组等量生理盐水灌胃，连续给药7天后制备含药血清。将HepG2.2.15肝癌细胞分为空白对照组（等量培养基）、空白血清组（100%空白血清∶培养基=1∶9）、恩替卡韦组（15 μmol/ml恩替卡韦∶培养基=1∶9）及恩替卡韦+龙柴方低、中、高剂量血清组（15 μmol/ml恩替卡韦∶100%龙柴方低、中、高剂量含药血清∶培养基=1∶1∶8），培养24 h。MTT法检测各组细胞存活率，荧光定量PCR法测定HBV DNA表达量；ELISA法测定乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）表达量；Western blot法检测P-糖蛋白（P-gp）、蛋白激酶B（AKT）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）蛋白表达。

结果

各组HepG2.2.15细胞存活率差异均无统计学意义（

＞0.05）。与空白血清组比较，恩替卡韦+龙柴方中、低剂量血清组HBV DNA水平、HBeAg表达量明显降低（

＜0.01）。与空白组对照比较，恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组HBsAg表达量降低（

＜0.05）。与空白血清组和恩替卡韦组比较，恩替卡韦+龙柴方低剂量血清组PI3K蛋白表达降低，恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组PI3K、AKT、P-gp蛋白表达均降低，PTEN蛋白表达升高（

＜0.05或

＜0.01）。与恩替卡韦组+龙柴方高剂量血清组比较，恩替卡韦组+龙柴方中剂量血清组HBV DNA水平降低，PTEN蛋白表达升高（

＜0.05或

＜0.01）。

结论

龙柴方对恩替卡韦抗HBV产生增效作用，其机制可能与上调PETN蛋白，抑制PI3K/AKT信号通路，从而下调P-gp表达有关，且以中剂量效果最佳。

Abstract

Objective

To explore the effect of

Longchai Formula

（龙柴方） adjuvant to entecavir on anti-hepatitis B virus （HBV） function， and to explore the possible mechanism.

Methods

Twenty-four SD rats were randomly divided into blank group and low-， medium- and high-dose

Longchai Formula

groups， with six rats in each group. Rats in the low-， medium- and high-dose

Longchai Formula

groups were given 9.84， 19.68， and 39.36 g/（kg·d） of

Longchai Formula

liquid by gavage， respectively， while those in the blank group were given the same amount of normal saline as the medium-dose

Longchai Formula

group by gavage， for continous seven days to prepare the medicated serum. HepG2.2.15 liver cancer cells were divided into blank control group （equivalent medium）， blank serum group （100% blank serum∶medium = 1∶9）， entecavir group （15 μmol/ml entecavir∶medium = 1∶9）） and entecavir plus low-， medium- and high-dose

Longchai Formula

groups （15 μmol/ml entecavir∶100% low-， medium- and high-dose

Longchai Formula

-containing serum∶medium = 1∶1∶8）， cultured for 24 h. The survival rate of cells was detected by MTT method， and the expression of HBV DNA was detected by fluorescence quantitative PCR method. The expression levels of hepatitis B virus surface antigen （HBsAg） and hepatitis B virus e antigen （HBeAg） were determined by ELISA. Western blot was used to detect the protein expressions of P-glycoprotein （P-gp）， protein kinase B （AKT）， phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K） and homologous phosphatase-tensin （PTEN）.

Results

There was no significant difference in the survival rate of HepG2.2.15 cells among the groups （

＞0.05）. Compared to those in the blank serum group， the HBV DNA level and HBeAg expression level in the entecavir plus medium- and low-dose

Longchai Formula-

containing serum groups significantly decreased （

＜0.01）. Compared to that in the blank control group， the HBsAg expression level in the entecavir plus medium-dose

Longchai Formula

-containing

serum group decreased （

＜0.05）. Compared to those in the blank serum group and the entecavir group， the PI3K protein expression in the entecavir plus low-dose

Longchai Formula

group was reduced， and the PI3K， AKT， P-gp protein expression in the entecavir plus medium-dose

Longchai Formula

group decreased， while the PTEN protein expression increased （

＜0.05 or

＜0.01）. The serum HBV DNA level in the entecavir plus medium-dose

Longchai Formula

group was significantly lower than that in the entecavir plus high-dose

Longchai Formula

group， and the expression of PTEN protein increased （

＜0.05 or

＜0.01）.

Conclusion

Longchai Formula

has a synergistic effect on entecavir against HBV， whose mechanism may be related to the up-regulation of PETN protein， the inhibition of PI3K/AKT signaling pathway， and thus the down-regulation of P-gp expression， and the middle dose has the best effect.

关键词

Keywords

references

National Clinical Guideline Centre （UK） . Hepatitis B （chronic）： diagnosis and management ［EB/OL］.（ 2013-06-26 ）［ 2022-04-05 ］. https：//www.nice.org.uk/guidance/cg165 https://www.nice.org.uk/guidance/cg165 .

王贵强，王福生，庄辉，等 . 慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）［J］. 中国病毒病杂志， 2020 ， 10 （ 1 ）： 1 - 25 .

姚莉 . 金实教授治疗慢性乙型肝炎证治经验辑要及方药机理探讨［D］. 南京：南京中医药大学， 2009 .

周洁 . 龙柴方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝郁脾虚，湿热瘀阻证的临床研究［D］. 南京：南京中医药大学， 2017 .

陈永青 . 龙柴方联合阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎临床研究［D］. 南京：南京中医药大学， 2011 .

李世颖 . HBV与多重耐药蛋白MDR1的相互作用及其机制研究［D］. 重庆：重庆医科大学， 2017 .

TAZZARI PL ， CAPPELLINI A ， RICCI F ， et al . Multidrug resistance-associated protein 1 expression is under the control of the phosphoinositide 3 kinase/Akt signal transduction network in human acute myelogenous leukemia blasts ［J］. Leukemia ， 2007 ， 21 （ 3 ）： 427 - 438 .

BARANCÍK M ， BOHÁCOVÁ V ， SEDLÁK J ， et al . LY294，002，a specific inhibitor of PI3K/Akt kinase pathway， antagonizes P-glycoprotein-mediated multidrug resistance ［J］. Eur J Pharm Sci ， 2006 ， 29 （ 5 ）： 426 - 434 .

SELLS MA ， CHEN ML ， ACS G . Production of hepatitis B virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA ［J］. Proc Natl Acad Sci USA ， 1987 ， 84 （ 4 ）： 1005 - 1009 .

胡平平，李军，朱传龙 . 乙型肝炎病毒体外培养细胞模型研究进展［J］. 肝脏， 2017 ， 22 （ 9 ）： 841 - 844 .

徐叔云，卞如濂，陈修 . 药理实验方法学［M］. 3版 . 北京：人民卫生出版社， 2001 ： 1861 - 1863 .

李前进 . 慢性乙型肝炎名医临床经验研究［D］. 广州：广州中医药大学， 2012 .

王萍，朱方石 . 基于文献回顾的慢性乙型肝炎中医治法分类研究［J］. 江苏中医药， 2011 ， 43 （ 11 ）： 76 - 77 .

安振涛，徐婷婷，严展鹏，等 . 龙柴方治疗乙肝肝纤维化疗效机制的理论探讨［J］. 时珍国医国药， 2019 ， 30 （ 6 ）： 1439 - 1441 .

郑岳，孙伟，卢坤玲，等 . 龙葵多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用及其机制［J］. 山东医药， 2016 ， 56 （ 8 ）： 23 - 25 .

WANG AR ， MI LF ， ZHANG ZL ， et al . Saikosaponin A improved depression-like behavior and inhibited hippocampal neuronal apoptosis after cerebral ischemia through p-CREB/BDNF pathway ［J］. Behav Brain Res ， 2021 ， 403 ： 113138 . doi： 10.1016/j.bbr.2021.113138 http://dx.doi.org/10.1016/j.bbr.2021.113138 .

李曼，张露蓉 . 中药白花蛇舌草抗炎作用研究进展［J］. 辽宁中医药大学学报， 2021 ， 23 （ 10 ）： 164 - 167 .

WANG GW ， ZHANG XL ， WU QH ， et al . The hepatoprotective effects of Sedum sarmentosum extract and its isolated major constituent through Nrf2 activation and NF-κB inhibition ［J］. Phytomedicine ， 2019 ， 53 ： 263 - 273 . doi： 10.1016/j.phymed.2018.09.023 http://dx.doi.org/10.1016/j.phymed.2018.09.023 .

董玲，黄湘，覃陆慧，等 . 山栀子根提取物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的作用研究［J］. 中药材， 2019 ， 42 （ 4 ）： 897 - 901 .

宋敏，封安杰，郭庆梅 . 女贞子化学成分和药理作用研究进展及质量标志物的预测分析［J］. 中国药房， 2021 ， 32 （ 24 ）： 3064 - 3068 .

李想，李冀 . 甘草提取物活性成分药理作用研究进展［J］. 江苏中医药， 2019 ， 51 （ 5 ）： 81 - 86 .

季宇彬，吴盼，郎郎 . 龙葵碱的毒理学研究进展［J］. 中草药， 2009 ， 40 （ S1 ）： 29 - 31 .

李梓盟，张佳彦，李菲，等 . 白花蛇舌草抗肿瘤化学成分及药理作用研究进展［J］. 中医药信息， 2021 ， 38 （ 2 ）： 74 - 79 .

STACY AE ， JANSSON PJ ， RICHARDSON DR . Molecular pharmacology of ABCG2 and its role in chemoresistance ［J］. Mol Pharmacol ， 2013 ， 84 （ 5 ）： 655 - 669 .

SHAIKH N ， SHARMA M ， GARG P . Selective fusion of heterogeneous classifiers for predicting substrates of membrane transporters ［J］. J Chem Inf Model ， 2017 ， 57 （ 3 ）： 594 - 607 .

QIAN J ， XIA M ， LIU W ， et al . Glabridin resensitizes p-glycoprotein-overexpressing multidrug-resistant cancer cells to conventional chemotherapeutic agents ［J］. Eur J Pharmacol ， 2019 ， 852 ： 231 - 243 . doi： 10.1016/j.ejphar. 2019.04.002 http://dx.doi.org/10.1016/j.ejphar.2019.04.002 .

NARAYANANKUTTY A . Phytochemicals as PI3K/Akt/ mTOR inhibitors and their role in breast cancer treatment ［J］. Recent Pat Anticancer Drug Discov ， 2020 ， 15 （ 3 ）： 188 - 199 .

ZHANG L ， LI Y ， WANG Q ， et al . The PI3K subunits， P110α and P110β are potential targets for overcoming P-gp and BCRP-mediated MDR in cancer ［J］. Mol Cancer ， 2020 ， 19 （ 1 ）： 10 .

MCLOUGHLIN NM ， MUELLER C ， GROSSMANN TN . The therapeutic potential of PTEN modulation： targeting strategies from gene to protein ［J］. Cell Chem Biol ， 2018 ， 25 （ 1 ）： 19 - 29 .

BAHRAMI A ， KHAZAEI M ， HASANZADEH M ， et al . Therapeutic potential of targeting PI3K/AKT pathway in treatment of colorectal cancer： rational and progress ［J］. J Cell Biochem ， 2018 ， 119 （ 3 ）： 2460 - 2469 .

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