二至丸不同时间给药对衰老性肝损伤模型小鼠肝组织生物钟相关因子Bmal1、Cry1表达的影响

马湘宇; 宫宇晴; 卫心怡; 冯梦林; 李三强; 段冷昕

doi:10.13288/j.11-2166/r.2023.04.013

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二至丸不同时间给药对衰老性肝损伤模型小鼠肝组织生物钟相关因子Bmal1、Cry1表达的影响

实验研究 | 更新时间：2023-02-14

- 二至丸不同时间给药对衰老性肝损伤模型小鼠肝组织生物钟相关因子Bmal1、Cry1表达的影响
- Effect of Erzhi Pill （二至丸） of Different Dosing Time on the Expression of Biological Clock-related Factors Bmal1 and Cry1 in the Liver Tissue of Aging Liver Injury Model Mice
- 中医杂志 2023年64卷第4期页码：387-392
- 作者机构：
  
  河南科技大学基础医学院，河南省洛阳市开元大道263号，471000
- 作者简介：
  
  lengxinduan@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金(82170606);河南省科技攻关计划(21A360001)
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2023.04.013
  中图分类号：
- 收稿：2022-04-28，
  
  修回：2022-09-30，
  
  纸质出版：2023-02-17
- 稿件说明：
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马湘宇,宫宇晴,卫心怡等.二至丸不同时间给药对衰老性肝损伤模型小鼠肝组织生物钟相关因子Bmal1、Cry1表达的影响[J].中医杂志,2023,64(04):387-392.

MA Xiangyu,GONG Yuqing,WEI Xinyi,et al.Effect of Erzhi Pill （二至丸） of Different Dosing Time on the Expression of Biological Clock-related Factors Bmal1 and Cry1 in the Liver Tissue of Aging Liver Injury Model Mice[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2023,64(04):387-392.
马湘宇,宫宇晴,卫心怡等.二至丸不同时间给药对衰老性肝损伤模型小鼠肝组织生物钟相关因子Bmal1、Cry1表达的影响[J].中医杂志,2023,64(04):387-392. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2023.04.013.

MA Xiangyu,GONG Yuqing,WEI Xinyi,et al.Effect of Erzhi Pill （二至丸） of Different Dosing Time on the Expression of Biological Clock-related Factors Bmal1 and Cry1 in the Liver Tissue of Aging Liver Injury Model Mice[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2023,64(04):387-392. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2023.04.013.

摘要

目的

探讨不同时间给予二至丸对衰老性肝损伤的影响及可能作用机制。

方法

60只C57雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、二至丸1：00组、二至丸7：00组、二至丸13：00组、二至丸19：00组，每组10只。除正常对照组外其余各组小鼠每日皮下注射300 mg/kg

D-半乳糖诱导衰老性肝损伤模型，共56天。于造模第11天开始，二至丸1：00组、二至丸7：00组、二至丸13：00组、二至丸19：00组分别于1：00、7：00、13：00和19：00给予二至丸2.5 g/kg灌胃，正常对照组和模型组小鼠灌胃给予0.01 ml/g生理盐水，连续46天。检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）和过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平；HE染色观察肝组织病理形态变化，Western blot检测小鼠肝组织生物钟相关因子脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1（Bmal1）和隐花色素1（Cry1）蛋白表达水平。

结果

与正常对照组相比，模型组小鼠肝组织出现广泛水肿样变，细胞核固缩深染，肝索排列紊乱等，血清ALT、AST、MDA水平显著升高，血清SOD、CAT及肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平显著降低（

＜0.01）；与模型组相比，二至丸1：00组和二至丸7：00组小鼠肝组织病理学变化均有明显的改善，血清中的ALT、AST、MDA水平显著降低，血清SOD、CAT及肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平显著降低（

＜0.05或

＜0.01），二至丸13：00组和二至丸19：00组小鼠肝组织则表现出严重的病理性损伤，血清ALT、AST、SOD、CAT和MDA水平，肝组织Cry1蛋白水平差异无统计学意义（

＞0.05），二至丸19：00组小鼠肝组织Bmal1蛋白水平明显升高（

＜0.05）；与二至丸1：00组比较，二至丸7：00组小鼠血清ALT和AST水平显著升高，肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平，二至丸19：00组肝组织Bmal1蛋白水平均明显降低（

＜0.01）。

结论

二至丸对D-半乳糖诱导的小鼠衰老性肝损伤具有显著的保护作用，且其药理作用具有明显的时间差异性，其中于1：00给予二至丸的改善作用更好，作用机制可能与抗氧化应激、改善生物钟紊乱有关。

Abstract

Objective

To explore the effect and related mechanism of

Erzhi Pill

（二至丸） given at different times on the liver injury of aging mice.

Methods

Sixty C57 male mice were randomly divided into normal control group， model group and four

Erzhi Pill

groups of 1：00， 7：00， 13：00 and 19：00， with ten mice in each group. Except for the normal control group， mice were given subcutaneous injected of D-galactose （D-gal） at a dose of 300 mg·kg

-1

·d

-1

for 56 consecutive days to establish the aging liver injury model. The

Erzhi Pill

groups were given 2.5 g·kg

-1

Erzhi pill

at different time （1：00， 7：00， 13：00， 19：00） from the 11th day of modelling and lasted for 46 days. Meanwhile， the mice in the normal control group and model group were given 0.01 ml·g

-1

of normal saline by gavage. The serum levels of alanine transaminase （ALT）， aspartate aminotransferase （AST）， catalase （CAT）， superoxide dismutase （SOD）， and malonic dialdehyde （MDA） were detected. The HE staining was used to assess the pathological changes of liver tissue. The protein expression of Bmal1 and Cry1 in liver were detected by Western blot.

Results

Compared to those in the normal control group， the liver tissue of the mice in the model group showed extensive edema-like changes， nuclear pyknosis and deep staining， and disorderly arranged hepatic cords； the serum levels of ALT， AST and MDA in the model group increased significantly （

＜0.01）， while serum SOD and CAT levels decreased， as well as the protein expression of Bmal1 and Cry1 in the liver tissue （

＜0.01）. Compared to those in the model group， the liver histopathological changes were significantly improved in the

Erzhi Pill

1：00 group and 7：00 group， with significantly decreased ALT， AST and MDA levels and increased SOD， CAT levels and protein expression of Bmal1 and Cry1 （

＜0.05 or

＜0.01）； there were severe pathological damage in the liver tissue in the

Erzhi Pill

13：00 group 19：00 group， both having no significant differences in serum ALT， AST， SOD， CAT and MDA levels and Cry1 protein expression compared to the model group （

＞0.05）； the

Erzhi Pill

19：00 group had higher Bmal1 protein expression than the model group （

＜0.05）. Compared to those in the

Erzhi Pill

1：00 group， the serum ALT and AST levels in the

Erzhi Pill

7：00 group significantly increased， while the Bmal1 and Cry1 protein le-vels in the

Erzhi Pill

7：00 group， and the Bmal1 protein level in the

Erzhi Pill

19：00 group significantly decreased （

＜0.01）.

Conclusion

Erzhi Pill

shows significant protective effect against aging liver injury induced by D-gal in mice， with obvious difference in the pharmacological effect when given at different times， among which administration at 1：00 works best. The mechanism may be related to oxidative stress and improvement of biological clock disorder.

关键词

Keywords

references

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