抑肝扶脾方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织AKT/mTOR通路的影响

酒苏婷; 李慧颖; 孙月婷; 崔松香; 徐心田; 郑浩; 陆为民

doi:10.13288/j.11-2166/r.2025.03.013

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抑肝扶脾方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织AKT/mTOR通路的影响

实验研究 | 更新时间：2025-01-26

- 抑肝扶脾方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织AKT/mTOR通路的影响
- Effect of Yigan Fupi Prescription （抑肝扶脾方） on the AKT/mTOR Pathway in the Colon Tissue of Diarrhea-Type Irritable Bowel Syndrome Model Rats with Liver Stagnation and Spleen Deficiency Pattern
- 中医杂志 2025年66卷第3期页码：290-299
- 作者机构：
  
  1.南京中医药大学附属医院，江苏省南京市秦淮区汉中路155号，210029
  2.云南省曲靖市中医院
  3.南京市浦口区中医院
- 作者简介：
  
  wmlu@163.com；（025）86617141
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金(82305135);国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作建设项目(国中医药人教发〔2010〕59号);江苏省中医药管理局中医重点专科建设项目重点项目(ZD202309);江苏省中医药管理局科技发展计划(苏中医科教〔2023〕18号);南京中医药大学校“揭榜挂帅”重大项目(JBGS202405)
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2025.03.013
  中图分类号：
- 收稿：2024-09-30，
  
  修回：2024-12-02，
  
  纸质出版：2025-02-02
- 稿件说明：
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酒苏婷,李慧颖,孙月婷等.抑肝扶脾方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织AKT/mTOR通路的影响[J].中医杂志,2025,66(03):290-299.

JIU Suting,LI Huiying,SUN Yueting,et al.Effect of Yigan Fupi Prescription （抑肝扶脾方） on the AKT/mTOR Pathway in the Colon Tissue of Diarrhea-Type Irritable Bowel Syndrome Model Rats with Liver Stagnation and Spleen Deficiency Pattern[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2025,66(03):290-299.
酒苏婷,李慧颖,孙月婷等.抑肝扶脾方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织AKT/mTOR通路的影响[J].中医杂志,2025,66(03):290-299. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2025.03.013.

JIU Suting,LI Huiying,SUN Yueting,et al.Effect of Yigan Fupi Prescription （抑肝扶脾方） on the AKT/mTOR Pathway in the Colon Tissue of Diarrhea-Type Irritable Bowel Syndrome Model Rats with Liver Stagnation and Spleen Deficiency Pattern[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2025,66(03):290-299. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2025.03.013.

摘要

目的

从蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路探究抑肝扶脾方治疗肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征（IBS-D）的可能作用机制。

方法

将60只SD大鼠随机分为对照组，模型组，抑肝扶脾方低、中、高剂量组，匹维溴铵组，每组10只。除对照组外其余各组通过夹尾刺激21天+番泻叶灌胃14天的方法建立肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型。造模成功后抑肝扶脾方低、中、高剂量组给药量分别为0.96、1.93、3.87 g/（kg·d），匹维溴铵组给药量为13.5 mg/（kg·d），对照组及模型组予10 ml/（kg·d）蒸馏水，各组均每天灌胃1次，连续14天。实验期间记录各组大鼠一般情况，造模后及给药后比较大鼠体质量、Bristol粪便评分、腹壁撤退反射实验（AWR）评分；HE染色观察大鼠结肠组织病理形态；ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α （TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）水平；免疫荧光法检测大鼠结肠组织中AKT/mTOR通路相关蛋白［包括磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）/AKT、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/mTOR］相对表达量；Western Blot法检测大鼠结肠组织中自噬相关蛋白［包括UNC-51样激酶（ULK1）、Beclin1（自噬关键分子酵母Atg6同系物1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）］以及紧密连接蛋白［包括闭合蛋白（Occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）］水平。

结果

造模后，与对照组比较，其余各组大鼠体质量降低，粪便Bristol评分以及20、40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分均升高（

＜0.05或

＜0.01）。给药后，与对照组比较，模型组大鼠体质量以及结肠组织中ULK1、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Occludin、ZO-1蛋白水平均降低（

＜0.05或

＜0.01）；粪便Bristol评分，20、40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平，以及结肠组织中p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均升高（

＜0.05或

＜0.01）；病理形态结果显示，结肠组织固有层腺体上部杯状细胞明显减少，少量炎性细胞浸润；黏膜下层胶原纤维溶解，分界不清，着色变淡，微血管充血、扩张。与模型组比较，抑肝扶脾方各剂量组及匹维溴铵组大鼠体质量，以及结肠组织中Beclin1、Occludin、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平均升高（

＜0.05或

＜0.01）；粪便Bristol评分，40、60、80 mmHg压力级别下AWR评分，血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平，以及结肠组织中p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均降低（

＜0.05或

＜0.01）；抑肝扶脾方各剂量组及匹维溴铵组病理形态有不同程度的改善。与匹维溴铵组比较，抑肝扶脾方低、中剂量组在20、40、60 mmHg压力级别下AWR评分均升高，抑肝扶脾方低剂量血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，抑肝扶脾方各剂量组结肠组织中p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量均升高（

＜0.05）。与抑肝扶脾方低剂量组比较，抑肝扶脾方高剂量组及匹维溴铵组在各压力级别下AWR评分、结肠组织中p-AKT/AKT蛋白相对表达量降低，抑肝扶脾方中、高剂量组血清中TNF-α、IL-

1β水平升高，结肠组织中p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量降低（

＜0.05）。

结论

抑肝扶脾方可有效改善肝郁脾虚型IBS-D模型大鼠结肠组织病理损伤，降低粪便Bristol及AWR评分，其作用机制可能与降低炎症因子水平，抑制结肠组织中AKT/mTOR通路相关蛋白，从而提高自噬相关蛋白水平有关。

Abstract

Objective

To explore the possible mechanism of

Yigan Fupi Prescription

（抑肝扶脾方， YFP） in treating diarrhea-type irritable bowel syndrome （IBS-D） by investigating the AKT/mTOR signaling pathway.

Methods

Sixty SD rats were randomly divided into control group， model group， YFP low-， medium-， and high-dose group， and pinaverium bromide group， with 10 rats in each group. All groups but the control group， were subjected to 21 days of tail-clamping stimulation and 14 days of senna leaf gavage to establish a liver stagnation and spleen deficiency-type IBS-D rat model. After successful modeling， the YFP low-， medium-， and high-dose group were administered 0.96， 1.93， and 3.87 g/（kg·d） of the prescription， respectively. The pinaverium bromide group was given 13.5 mg/（kg·d）， while the control and model groups were given 10 ml/（kg·d） distilled water. All groups were administered once daily for 14 consecutive days. General conditions of the rats were recorded during the experiment， and after modeling and drug administration， body weight， Bristol stool score， abdominal withdrawal reflex （AWR） score， and histo pathology of colon tissue were observed under HE staining. ELISA was used to detect serum levels of tumor necrosis factor α （TNF-α）， interleukin-1β （IL-1β）， and interleukin-6 （IL-6）. Immunofluorescence was employed to detect the levels of AKT/mTOR pathway-related proteins including phosphorylated AKT （p-AKT）/AKT and phosphorylated mTOR （p-mTOR）/mTOR in the colon tissue. Western Blotting was used to detect the levels of autophagy-related proteins， including UNC-51-like kinase 1 （ULK1）， Beclin1 and LC3， and tight junction proteins including Occludin and ZO-1 in the colon tissue.

Results

After modeling， compared to the control group， the body weight of rats in the other groups decreased， and Bristol stool scores， as well as AWR scores under 20， 40， 60， and 80 mmHg increased （

＜0.05 or

＜0.01）. After drug administration， compared to the control group， the model group showed reduced body weight， decreased ULK1， Beclin1， LC3Ⅱ/LC3Ⅰ， Occludin， and ZO-1 protein levels in the colon tissue （

＜0.05 or

＜0.01）， and increased Bristol stool scores， AWR scores， serum TNF-α， IL-1β， and IL-6 levels， as well as p-AKT/AKT and p-mTOR/mTOR protein relative expression levels （

＜0.05 or

＜0.01）. Pathological results showed a significant reduction in goblet cells in the upper part of the glandular layer of the colon， with mild inflammatory cell infiltration. The submucosal collagen fibers were dissolved， with unclear boundaries， pale staining， and microvascular congestion and dilation. Compared with the model group， the YFP low-， medium-， and high-dose group and the pinaverium bromide group showed increased body weight， Beclin1， Occludin， and LC3Ⅱ/LC3Ⅰ protein levels （

＜0.05 or

＜0.01）， and decreased Bristol stool scores， AWR scores under 40， 60， and 80 mmHg， serum IL-1β， IL-6， TNF-α levels， and p-AKT/AKT， p-mTOR/mTOR protein relative expression levels （

＜0.05 or

＜0.01）. The pathological morphology of the rats in the YFP groups and pinaverium bromide group showed varying degrees of improvement. Compared with the pinaverium bromide group， the YFP low- and medium-dose group showed increased AWR scores under 20， 40， and 60 mmHg （

＜0.05）. The YFP low-dose group had reduced TNF-α， IL-1β， and IL-6 levels， and increased p-mTOR/mTOR protein relative expression levels occured in all YFP groups （

＜0.05）. Compared with the YFP low-dose group， the YFP high-dose group and pinaverium bromide group

showed decreased AWR scores under different pressure levels and reduced p-AKT/AKT protein relative expression levels， while the YFP medium- and high-dose group had elevated serum TNF-α， IL-1β levels and reduced p-mTOR/mTOR protein relative expression levels （

＜0.05）.

Conclusion

YFP can effectively improve the pathological injury of colon tissue in IBS-D model rats with liver stagnation and spleen deficiency， reduce Bristol stool and AWR scores， and its mechanism may be related to reducing level of inflammatory factors and inhibiting AKT/mTOR pathway-related proteins in colon tissue， thereby enhancing the expression of autophagy-related proteins in the colon tissue.

关键词

Keywords

references

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