肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴的影响

王永福; 柯威; 谢翔雨; 唐洪梅; 司刘哲; 柴玉娜

doi:10.13288/j.11-2166/r.2026.04.016

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴的影响

实验研究 | 更新时间：2026-02-10

- 肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴的影响
- Effect of Changji'an Formula （肠激安方） on the miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK Axis in Colonic Tissues in Diarrhea-predominant Irritable Bowel Syndrome Model Rat with Liver Depression and Spleen Deficiency Syndrome
- 中医杂志 2026年67卷第4期页码：439-446
- 作者机构：
  
  1.郑州大学第一附属医院，河南省郑州市建设东路1号，450052
  2.佛山市中医院
  3.广州中医药大学第一临床医学院
  4.广州中医药大学第一附属医院
- 作者简介：
  
  通信作者：yuna999@126.com
- 基金信息：
  
  河南省自然科学基金(242300420397;242300421271);河南省医学科技攻关计划项目(LHGJ20230254)
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2026.04.016
  中图分类号：
- 收稿：2025-09-04，
  
  修回：2025-11-14，
  
  纸质出版：2026-02-17
- 稿件说明：
移动端阅览
王永福,柯威,谢翔雨等.肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴的影响[J].中医杂志,2026,67(04):439-446.

WANG Yongfu,KE Wei,XIE Xiangyu,et al.Effect of Changji'an Formula （肠激安方） on the miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK Axis in Colonic Tissues in Diarrhea-predominant Irritable Bowel Syndrome Model Rat with Liver Depression and Spleen Deficiency Syndrome[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2026,67(04):439-446.
王永福,柯威,谢翔雨等.肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠组织miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴的影响[J].中医杂志,2026,67(04):439-446. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2026.04.016.

WANG Yongfu,KE Wei,XIE Xiangyu,et al.Effect of Changji'an Formula （肠激安方） on the miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK Axis in Colonic Tissues in Diarrhea-predominant Irritable Bowel Syndrome Model Rat with Liver Depression and Spleen Deficiency Syndrome[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2026,67(04):439-446. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2026.04.016.

摘要

目的

从微小RNA-29b-3p（miR-29b-3p）/肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF3）/核因子κB（NF-κB）/肌球蛋白轻链激酶（MLCK）轴探究肠激安方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征（IBS-D）肠道通透性影响的可能机制。

方法

取出生1天的雄性SD窝鼠24只，采用三因素法（母婴分离+醋酸刺激+束缚应激）共6周制备肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、匹维溴铵组和肠激安方低、高剂量组，每组6只，另取6只同龄未造模SD大鼠作为对照组。肠激安方低、高剂量组分别给予肠激安方溶液16.74、33.48 g/（kg·d）灌胃，匹维溴铵组大鼠给予匹维溴铵片0.018 g/（kg·d）灌胃，对照组同时予10 ml/（kg·d）蒸馏水灌胃。每日1次，连续

14天。灌胃结束后，检测各组大鼠粪便含水量，采用ELISA法检测大鼠血清肠道通透性指标D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）和脂多糖（LPS）含量，实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织

miR

29b

3p、TRAF3

、肿瘤坏死因子α（

TNF

α）、p65、p50、MLCK

mRNA表达，Western Blot法检测结肠组织TRAF3、TNF-α、p65、磷酸化p65（p-p65）、MLCK、肌球蛋白轻链（MLC）、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）及紧密连接蛋白［连接黏附因子A（JAM-A）、闭锁蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白1（Claudin-1）］蛋白水平。

结果

与对照组比较，模型组大鼠粪便含水量和血清D-LA、DAO、LPS含量均升高，结肠组织JAM-A、Occludin、Claudin-1蛋白水平降低（

＜0.05或

＜0.01），结肠组织

miR

29b

3p、TNF

α、p65、p50、MLCK

mRNA表达升高，

TRAF3

mRNA及蛋白表达降低，TNF-α、MLCK蛋白水平及p-p65/p65、p-MLC/MLC比值升高（

＜0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠粪便含水量及血清D-LA、DAO、LPS含量降低，结肠组织

miR

29b

3p、TNF

α、p65、p50、MLCK

mRNA表达降低，

TRAF3

mRNA表达升高；匹维溴铵组、肠激安方高剂量组大鼠结肠组织Occludin、Claudin-1、TRAF3蛋白水平升高，TNF-α、MLCK蛋白水平及p-p65/p65、p-MLC/MLC比值降低（

＜0.05或

＜0.01）。与肠激安方低剂量组比较，肠激安方高剂量组粪便含水量和血清DAO、LPS含量降低（

＜0.01）。与匹维溴铵组比较，肠激安方高剂量组大鼠血清DAO含量降低（

＜0.01）。

结论

肠激安方可能通过调控miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK轴，从而降低肝郁脾虚型IBS-D模型大鼠肠道通透性，恢复肠道屏障功能。

Abstract

Objective

To explore the potential mechanism of

Changji'an Formula

（肠激安方） on intestinal permeability for rats with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome （IBS-D） of liver depression and spleen deficiency syndrome by the microRNA-29b-3p （miR-29b-3p）/tumor necrosis factor receptor-associated factor 3 （TRAF3）/nuclear factor-κB （NF-κB）/myosin light chain kinase （MLCK） axis.

Methods

Twenty-four 1-day-old male Sprague-Dawley （SD） suckling rats were selected， and the IBS-D rat model of liver depression and spleen deficiency syndrome was established via a three-factor method，i.e. maternal separation plus a

cetic acid stimulation and restraint stress， for 6 consecutive weeks. After successful modeling， the rats were randomly divided into a model group， pinaverium bromide group， low-dose and high-dose

Changji'an Formula

groups， with 6 rats in each group. Another 6 age-matched non-modeled SD rats were included as the control group. The low-dose and high-dose

Changji'an Formula

groups were given intragastric administration of

Changji'an Formula

solution at doses of 16.74 g/（kg·d） and 33.48 g/（kg·d）， respectively； the pinaverium bromide group received intragastric administration of pinaverium bromide tablets at 0.018 g/（kg·d）； and the control group was given distilled water at 10 ml/（kg·d） via intragastric gavage. The intervention was conducted once daily for 14 consecutive days. After the gavage treatment， the fecal water content of rats in each group was measured. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the serum levels of intestinal permeability indicators， including D-lactic acid （D-LA）， diamine oxidase （DAO）， and lipopolysaccharide （LPS）. Quantitative real-time polymerase chain reaction （qRT-PCR） was conducted to determine the mRNA expression levels of

miR

29b

，

TRAF3

， tumor necrosis factor-α （

TNF

），

p65

，

p50

， and

MLCK

in colonic tissues. Western Blot analysis was employed to detect the protein expression levels of TRAF3， TNF-

， p65， phosphorylated p65 （p-p65）， MLCK， myosin light chain （MLC）， phosphorylated MLC （p-MLC）， and tight junction proteins including junctional adhesion molecule-A （JAM-A）， Occludin， and Claudin-1 in colonic tissues.

Results

Compared with the control group， the model group exhibited significantly increased fecal water content and serum levels of D-LA， DAO， and LPS， along with decreased protein expression levels of JAM-A，

Occludin， and Claudin-1 in colonic tissues （

＜0.05 or

＜0.01）. Additionally， in the model group， the mRNA expression levels of

miR

29b

，

TNF

，

p65

，

p50

， and

MLCK

in colonic tissues were up-regulated， while the mRNA and protein expression levels of

TRAF3

were down-regulated； the protein levels of TNF-α and MLCK， as well as the ratios of p-p65/p65 and p-MLC/MLC， significantly elevated （

＜0.01）. Compared with the model group， all treatment groups showed reduced fecal water content and serum levels of D-LA， DAO， and LPS， along with down-regulated mRNA expression levels of

miR

29b

，

TNF

，

p65

，

p50

， and

MLCK

， and up-regulated

TRAF3

mRNA expression in colonic tissues. Moreover， the pinaverium bromide group and high-dose

Changji'an Formula

group presented increased protein levels of Occludin， Claudin-1， and TRAF3， as well as decreased protein levels of TNF-α and MLCK， and reduced ratios of p-p65/p65 and p-MLC/MLC in colonic tissues （

＜0.05 or

＜0.01）. Compared with the low-dose

Changji'an Formula

group， the high-dose group had lower fecal water content and serum levels of DAO and LPS （

＜0.01）. In comparison with the pinaverium bromide group， the high-dose

Changji'an Formula

group showed a significant decrease in serum DAO level （

＜0.01）.

Conclusions

Changji'an Formula

can reduce intestinal permeability and restore intestinal barrier function in IBS-D rats of liver depression and spleen deficiency syndrome by regulating the miR-29b-3p/TRAF3/NF-κB/MLCK axis.

关键词

Keywords

references

HANNING N ， EDWINSON AL ， CEULEERS H ， et al . Intestinal barrier dysfunction in irritable bowel syndrome： a systematic review ［J］. Therap Adv Gastroenterol ， 2021 ， 14 ： 1756284821993586 . doi： 10.1177/1756284821993586 http://dx.doi.org/10.1177/1756284821993586 .

INCZEFI O ， EUTAMENE H ， PLACIDE F ， et al . Translational evaluation of Gelsectan ® effects on gut barrier dysfunction and visceral pain in animal models and irrit able bowel syndrome with diarrhoea ［J］. United European Gastroenterol J ， 2024 ， 12 （ 8 ）： 1102 - 1113 .

CHEN LJ ， PLANTINGA AM ， BURR R ， et al . Exploration of cytokines and microbiome among males and females with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome ［J］. Dig Dis Sci ， 2025 ， 70 （ 3 ）： 1043 - 1051 .

WANG YF ， KE W ， GAN JF ， et al . microRNA-29b-3p promotes intestinal permeability in IBS-D via targeting TRAF3 to regulate the NF-κB-MLCK signaling pathway ［J］. PLoS One ， 2023 ， 18 （ 7 ）： e0287597 .

冯奕钧，焦召华，李岩 . 腹泻型肠易激综合征中医药治疗进展［J］. 中医药学报， 2024 ， 52 （ 10 ）： 109 - 114 .

中华中医药学会脾胃病分会 . 肠易激综合征中医诊疗专家共识（2024）［J］. 中医杂志， 2024 ， 65 （ 18 ）： 1948 - 1956 .

唐洪梅，黄樱华，李得堂，等 . 肠激安方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠T淋巴细胞和5-羟色胺的影响［J］. 广州中医药大学学报， 2009 ， 26 （ 2 ）： 164 - 168，200 .

石玉莹，唐洪梅，吴映秀，等 . 肠激安方对IBS-D大鼠肠道通透性的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2019 ， 25 （ 11 ）： 80 - 85 .

涂星 . 疏肝健脾止泻复方中药对IBS-D模型大鼠神经-内分泌-免疫网络的调控机制研究［D］. 广州：广州中医药大学， 2015 .

AL-CHAER ED ， KAWASAKI M ， PASRICHA PJ . A new model of chronic visceral hypersensitivity in adult rats induced by colon irritation during postnatal development ［J］. Gastroenterology ， 2000 ， 119 （ 5 ）： 1276 - 1285 .

黄继汉，黄晓晖，陈志扬，等 . 药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算［J］. 中国临床药理学与治疗学， 2004 ， 9 （ 9 ）： 1069 - 1072 .

唐洪梅，刘友章，曾惠芳，等 . 肠激安肠溶胶囊治疗腹泻型IBS临床前开发［Z/OL］.（ 2008-05-12 ）［ 2025-09-04 ］. https：//kns.cnki.net/kcms2/article/abstract？v=dKcr_PZ1zctzXqtQCxUWTTpS03rqjAMlisqmgCaTNDhQHvtNoXa3qGbWUJ1kHDl_c6gEs99hiVJhZkhynQT3IgnrRhgf8NNDc838cYw3Kh_VP21LyXpjnBQiXsp0SMH-O4XSODff29lUiKwRtnGqX-NZjckaERkFUHQvkDNBkT-KS-y81MQDDg==&uniplatform=NZKPT&language=CHS https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=dKcr_PZ1zctzXqtQCxUWTTpS03rqjAMlisqmgCaTNDhQHvtNoXa3qGbWUJ1kHDl_c6gEs99hiVJhZkhynQT3IgnrRhgf8NNDc838cYw3Kh_VP21LyXpjnBQiXsp0SMH-O4XSODff29lUiKwRtnGqX-NZjckaERkFUHQvkDNBkT-KS-y81MQDDg==&uniplatform=NZKPT&language=CHS .

廖小红 . 肠激安胶囊对肝脾不调型IBS-D的药理毒理研究［D］. 广州：广州中医药大学， 2012 .

MAHURKAR-JOSHI S ， RANKIN CR ， VIDELOCK EJ ， et al . The colonic mucosal microRNAs， microRNA-219a-5p， and microRNA-338-3p are downregulated in irritable bowel syndrome and are associated with barrier function and MAPK signaling ［J］. Gastroenterology ， 2021 ， 160 （ 7 ）： 2409 - 2422 .

LI MY ， LIU NH ， ZHU JF ， et al . Engineered probiotics with sustained release of interleukin-2 for the treatment of inflammatory bowel disease after oral delivery ［J］. Biomaterials ， 2024 ， 309 ： 122584 . doi： 10.1016/j.biomaterials.2024.122584 http://dx.doi.org/10.1016/j.biomaterials.2024.122584 .

ZHOU SY ， GILLILLAND M 3 RD， WU XY， et al. FODMAP diet modulates visceral nociception by lipopolysaccharide-mediated intestinal inflammation and barrier dysfunction［J］. J Clin Invest ， 2018， 128 （ 1 ）： 267 - 280 .

HOU QK ， HUANG YQ ， ZHANG CR ， et al . microRNA-200a targets cannabinoid receptor 1 and serotonin transporter to increase visceral hyperalgesia in diarrhea-predominant irritable bowel syndrome rats ［J］. J Neurogastroenterol Motil ， 2018 ， 24 （ 4 ）： 656 - 668 .

LU YY ， CHAI YN ， QIU JL ， et al . Integrated omics analysis reveals the epigenetic mechanism of visceral hypersensitivity in IBS-D ［J］. Front Pharmacol ， 2023 ， 14 ： 1062630 . doi： 10.3389/fphar.2023.1062630 http://dx.doi.org/10.3389/fphar.2023.1062630 .

JUNG DE ， SEO MK ， JO JH ， et al . PUM1-TRAF3 fusion protein activates non-canonical NF-κB signaling via rescued NIK in biliary tract cancer ［J］. NPJ Precis Oncol ， 2024 ， 8 （ 1 ）： 170 .

ZHANG B ， SHETTI D ， FAN CH ， et al . miR-29b-3p promotes progression of MDA-MB-231 triple-negative breast cancer cells through downregulating TRAF3 ［J］. Biol Res ， 2019 ， 52 （ 1 ）： 38 .

HAQUE M ， KAMINSKY L ， ABDULQADIR R ， et al . Lactobacillus acidophilus inhibits the TNF-α-induced increase in intestinal epithelial tight junction permeability via a TLR-2 and PI3K-dependent inhibition of NF-κB activation ［J］. Front Immunol ， 2024 ， 15 ： 1348010 . doi： 10.3389/fimmu.2024.1348010 http://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2024.1348010 .

LEE JY ， KIM CY . Preventive effects of thinned apple extracts on TNF-α-induced intestinal tight junction dysfunction in caco-2 cells through myosin light chain kinase suppression ［J］. Foods ， 2022 ， 11 （ 12 ）： 1714 .

NIGHOT M ， RAWAT M ， AL-SADI R ， et al . Lipopolysaccharide-induced increase in intestinal permeability is mediated by TAK-1 activation of IKK and MLCK/MYLK gene ［J］. Am J Pathol ， 2019 ， 189 （ 4 ）： 797 - 812 .

PICHE T . Tight junctions and IBS：the link between epithelial permeability， low-grade inflammation， and symptom generation？［J］ Neurogastroenterol Motil ， 2014 ， 26 （ 3 ）： 296 - 302 .

查看原文

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

“疏肝调神”针刺对脂多糖诱导抑郁模型小鼠海马TLR4/NF-κB通路的影响

从脾虚生浊辨治腹泻型肠易激综合征经验

眼针治疗腹泻型肠易激综合征60例临床研究

长夏环境中松果腺对大鼠小肠差异基因的影响

从“火郁发之”探讨胆碱能性荨麻疹辨治思路