活血温胆方对心房颤动痰热瘀阻证模型大鼠心肌组织蛋白质组学的影响及实验验证

侯艾琳; 余文熙; 陈琛; 刘宇轩; 吉星; 吴婵; 史大卓; 张莹

doi:10.13288/j.11-2166/r.2026.06.011

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活血温胆方对心房颤动痰热瘀阻证模型大鼠心肌组织蛋白质组学的影响及实验验证

实验研究 | 更新时间：2026-03-17

- 活血温胆方对心房颤动痰热瘀阻证模型大鼠心肌组织蛋白质组学的影响及实验验证
- Effects of Huoxue Wendan Formula （活血温胆方） on Myocardial Tissue Proteomics in Atrial Fibrillation Model Rats with Phlegm-Heat Stasis Obstruction Syndrome and Experimental Verification
- 中医杂志 2026年67卷第6期页码：657-668
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院西苑医院，北京市海淀区西苑操场1号，100091
  2.北京中医药大学研究生院
- 作者简介：
  
  张莹，E-mail：echo993272@sina.com
- 基金信息：
  
  中国中医科学院西苑医院具有知识产权的医疗机构制剂和中药新药研发与转化专项(XYZX0303-18)
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2026.06.011
  中图分类号：
- 收稿：2025-09-15，
  
  修回：2026-03-06，
  
  纸质出版：2026-03-17
- 稿件说明：
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侯艾琳,余文熙,陈琛等.活血温胆方对心房颤动痰热瘀阻证模型大鼠心肌组织蛋白质组学的影响及实验验证[J].中医杂志,2026,67(06):657-668.

HOU Ailin,YU Wenxi,CHEN Chen,et al.Effects of Huoxue Wendan Formula （活血温胆方） on Myocardial Tissue Proteomics in Atrial Fibrillation Model Rats with Phlegm-Heat Stasis Obstruction Syndrome and Experimental Verification[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2026,67(06):657-668.
侯艾琳,余文熙,陈琛等.活血温胆方对心房颤动痰热瘀阻证模型大鼠心肌组织蛋白质组学的影响及实验验证[J].中医杂志,2026,67(06):657-668. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2026.06.011.

HOU Ailin,YU Wenxi,CHEN Chen,et al.Effects of Huoxue Wendan Formula （活血温胆方） on Myocardial Tissue Proteomics in Atrial Fibrillation Model Rats with Phlegm-Heat Stasis Obstruction Syndrome and Experimental Verification[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2026,67(06):657-668. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2026.06.011.

摘要

目的

基于蛋白质组学技术探究活血温胆方治疗心房颤动（房颤）痰热瘀阻证的可能作用机制。

方法

将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、活血温胆方组和抑制剂组，每组10只，抑制剂组用于后续实验验证。除空白组外，其余各组大鼠采用乙酰胆碱氯化钙混合溶液尾静脉注射+高脂饮食+脂多糖腹腔注射的方法建立房颤痰热瘀阻证大鼠模型。实验一：造模成功后活血温胆方组予活血温胆方12.6 g/（kg·d）灌胃，空白组、模型组给予12.6 g/（kg·d）的灭菌饮用水，均每日1次，持续2周。比较空白组、模型组、活血温胆方组大鼠体质量、肛温、舌象RGB值；心电图观察房颤诱发及持续时间；心脏超声检测左心房大小（LA）、主动脉内径（AO）、射血分数（EF）、缩短分数（FS）；左心房组织进行HE染色、Masson染色（心肌胶原容积分数）和天狼星红染色［Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）/Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）］；肝脏左外叶组织进行HE染色和油红O染色（肝脏脂滴面积）；血液生化指标包括总胆固醇（TC）、低密度胆固醇（LDL-C）、全血黏度（低切、中切、高切）、血浆黏度、红细胞沉降率及凝血指标凝血酶时间（TT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原（FIB）；ELISA法检测炎症因子［包括C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］及纤维化因子［包括基质金属蛋白酶9（MMP9）、Collagen Ⅰ、半乳糖凝集素3（Gal-3）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）］水平；心脏组织进行非数据依赖性采集蛋白质组学研究。实验二：根据蛋白质组学研究结果，抑制剂组大鼠给予12.6 g/（kg·d）的灭菌饮用水，每日1次，同时腹腔注射肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）抑制剂C25-140 5 mg/kg，隔日1次，连续2周。检测心肌组织TRAF6/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白、mRNA表达及相关纤维蛋白水平。

结果

与空白组比较，模型组大鼠肛温升高，舌象RGB值降低，房颤平均持续时间延长，心功能EF、FS降低，LA/AO升高，左心房心肌胶原容积分数、Collagen Ⅰ/Collagen Ⅲ及肝脏左外叶脂滴相对面积均升高，LDL-C、FIB水平升高，TT、APTT、PT均降低，全血黏度（低切、中切、高切）、血浆黏度、红细胞沉降率均升高，红细胞压积降低，CRP、IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α水平均升高，MMP9、Gal-3、α-SMA、Collagen Ⅰ升高（

＜0.01）。与模型组比较，活血温胆方组上述各指标均改善（

＜0.05或

＜0.01）。蛋白质组学分析筛选出73个关键逆转蛋白，其中TRAF6为核心蛋白，并富集在NF-κB信号通路上。活血温胆方和抑制剂组均可抑制TRAF6/NF-κB通路相关蛋白、mRNA表达及相关纤维蛋白水平（

＜0.05或

＜0.01）。

结论

活血温胆方可能通过抑制心肌组织TRAF6/NF-κB信号通路，减轻心肌炎症与纤维化反应，从而多靶点干预房颤痰热瘀阻证。

Abstract

Objective

To explore the potential mechanism of

Huoxue Wendan Formula

（活血温胆方） in treating atrial fibrillation with the phlegm-heat and stasis obstruction syndrome based on proteomics technology.

Methods

Forty Sprague-Dawley （SD） rats were randomly and equally divided into a blank group， a model group， a

Huoxue Wendan Formula

group， and an inhibitor group， and the inhibitor group was used for subsequent experimental verification. Except for the blank group， rats were administered a mixed solution of acetylcholine and calcium chloride via tail vein inject

ion， combined with a high-fat diet and intraperitoneal injection of lipopolysaccharide to establish a rat model of atrial fibrillation with the phlegm-heat and stasis obstruction syndrome.

Experiment 1

　After successful modeling， the

Huoxue Wendan Formula

group was given 12.6 g/（kg·d） of

Huoxue Wendan Formula

by gavage， while the control group and model group were given 12.6 g/（kg·d） of sterilized drinking water， once daily for 2 weeks. Body weight， anal temperature， and tongue RGB values were compared among the blank group， model group， and

Huoxue Wendan Formula

group. Electrocardiography was used to observe the induction and duration of atrial fibrillation， and cardiac ultrasound was performed to measure left atrial diameter （LA）， aortic diameter （AO）， ejection fraction （EF）， and fractional shortening （FS）. Left atrial tissue was subjected to hematoxylin-eosin （HE） staining， Masson staining （myocardial collagen volume fraction）， and Sirius red staining （Collagen Ⅰ/Collagen Ⅲ）. The left lateral lobe of the liver was examined using HE staining and oil red O staining （hepatic lipid droplet area）. Blood biochemical parameters including total cholesterol （TC）， low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， whole blood viscosity （low， middle， and high shear rates）， plasma viscosity， erythrocyte sedimentation rate （ESR）， and coagulation parameters such as thrombin time （TT）， activated partial thromboplastin time （APTT）， prothrombin time （PT）， and fibrinogen （FIB） were determined. ELISA was used to measure inflammatory factors including C-reactive protein （CRP）， interleukin-1β （IL-1β）， interleukin-6 （IL-6）， interleukin-17 （IL-17）， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， and fibrotic factors including matrix metalloproteinase 9 （MMP9）， Collagen Ⅰ， galectin-3 （Gal-3）， and α-smooth muscle actin （α-SMA）. Cardiac tissue was analyzed using data-independent acquisition-based proteomics.

Experiment 2

　Based on the proteomics results， rats in the inhibitor group

were given 12.6 g/（kg·d） of sterilized drin-king water once daily， along with intraperitoneal injection of the tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 （TRAF6） inhibitor C25-140 at a dose of 5 mg/kg once every other day for 2 weeks. The protein and mRNA expression levels of TRAF6/nuclear factor-κB （NF-κB） pathway-related factors and associated fibrotic markers in myocardial tissue were measured.

Results

Compared with the control group， the model group showed elevated anal temperature， decreased tongue RGB values， prolonged average duration of atrial fibrillation， reduced cardiac function parameters （EF， FS）， increased LA/AO ratio， elevated myocardial collagen volume fraction in the left atrium， increased Collagen Ⅰ/Collagen Ⅲ ratio， enlarged relative area of lipid droplets in the left lateral lobe of the liver， elevated levels of LDL-C and FIB， decreased TT， APTT， and PT， increased whole blood viscosity （at low， middle， and high shear rates）， plasma viscosity， and ESR， reduced hematocrit， and elevated levels of inflammatory factors （CRP， IL-1β， IL-6， IL-17， TNF-α） and fibrotic factors （MMP9， Gal-3， α-SMA， Collagen Ⅰ）， with statistically significant diffe-rences （

＜0.01）. Compared with the model group， the

Huoxue Wendan Formula

group exhibited significant improvements in all the aforementioned indicators （

＜0.05 or

＜0.01）. Proteomic analysis identified 73 key reversely expressed proteins， among which TRAF6 was identified as a core protein， and these proteins were enriched in the NF-κB signa-ling pathway. Both the

Huoxue Wendan Formula

group and the inhibitor group suppressed the protein and mRNA expression levels of TRAF6/NF-κB pathway-related factors and associated fibrotic markers （

＜0.05 or

＜0.01）.

Conclusion

The

Huoxue Wendan Formula

may attenuate myocardial inflammation and fibrosis by inhibi-ting the T

RAF6/NF-κB signaling pathway in myocardial tissue， thereby exerting multi-target therapeutic effects on atrial fibrillation with phlegm-heat stasis obstruction syndrome.

关键词

Keywords

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