黄芪-败酱草药对对HT-29细胞炎症模型JAK1/STAT6/SOCS1信号通路的影响

孙大娟; 魏秀楠; 程艳; 迟莉丽

doi:10.13288/j.11-2166/r.2023.03.014

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黄芪-败酱草药对对HT-29细胞炎症模型JAK1/STAT6/SOCS1信号通路的影响

实验研究 | 更新时间：2023-01-29

- 黄芪-败酱草药对对HT-29细胞炎症模型JAK1/STAT6/SOCS1信号通路的影响
- Effect of Drug Pair Huangqi （Radix Astragali） & Baijiangcao （Herba Patriniae） on HT-29 Cell Inflammation Model by Regulating JAK1/STAT6/SOCS1 Signaling Pathway
- 中医杂志 2023年64卷第3期页码：295-302
- 作者机构：
  
  1.山东中医药大学附属医院，山东省济南市历下区经十路16369号， 250014
  2.山东中医药大学
- 作者简介：
  
  chililiyl@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金(81673969;82205057)
- DOI：10.13288/j.11-2166/r.2023.03.014
  中图分类号：
- 收稿：2022-05-05，
  
  修回：2022-11-10，
  
  纸质出版：2023-02-02
- 稿件说明：
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孙大娟,魏秀楠,程艳等.黄芪-败酱草药对对HT-29细胞炎症模型JAK1/STAT6/SOCS1信号通路的影响[J].中医杂志,2023,64(03):295-302.

SUN Dajuan,WEI Xiunan,CHENG Yan,et al.Effect of Drug Pair Huangqi （Radix Astragali） & Baijiangcao （Herba Patriniae） on HT-29 Cell Inflammation Model by Regulating JAK1/STAT6/SOCS1 Signaling Pathway[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2023,64(03):295-302.
孙大娟,魏秀楠,程艳等.黄芪-败酱草药对对HT-29细胞炎症模型JAK1/STAT6/SOCS1信号通路的影响[J].中医杂志,2023,64(03):295-302. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2023.03.014.

SUN Dajuan,WEI Xiunan,CHENG Yan,et al.Effect of Drug Pair Huangqi （Radix Astragali） & Baijiangcao （Herba Patriniae） on HT-29 Cell Inflammation Model by Regulating JAK1/STAT6/SOCS1 Signaling Pathway[J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2023,64(03):295-302. DOI： 10.13288/j.11-2166/r.2023.03.014.

摘要

目的

探讨黄芪-败酱草药对治疗溃疡性结肠炎（UC）的可能作用机制。

方法

脂多糖（LPS）20 μg/ml干预HT-29细胞24 h，诱导建立炎症细胞模型。采用8个不同浓度（1.125、2.25、4.5、9、18、36、72、144 mg/ml）黄芪-败酱草干预炎症细胞模型24 h，CCK-8法检测细胞活力，选取细胞活力最高的3个黄芪-败酱草浓度用于后续实验。实验分为空白组、模型组、美沙拉嗪组及黄芪-败酱草低、中、高剂量组6组。除空白组外，其余各组细胞建立炎症模型后，美沙拉嗪组加入1 mg/ml的5-氨基水杨酸100 μl，黄芪-败酱草低、中、高剂量组分别加入筛选浓度的低、中、高浓度黄芪-败酱草100 μl，空白组、模型组均加入100 μl完全培养基，干预24 h。ELISA法检测炎性因子白细胞介素13（IL-13）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素18（IL-18）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达；Western blot法检测咬合蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白1（Claudin-1）、磷酸化蛋白质酪氨酸激酶1（p-JAK1）、磷酸化信号转导和转录激活因子6（p-STAT6）、蛋白质酪氨酸激酶1（JAK1）、信号转导和转录激活因子6（STAT6）、细胞因子信号传导抑制蛋白1（SOCS1）蛋白表达，qRT-PCR法检测JAK1、STAT6、SOCS1 mRNA表达。

结果

最终选择黄芪-败酱草浓度2.25、4.5、9 mg/ml作为低、中、高浓度进行后续实验。与模型组比较，黄芪-败酱草高剂量组和美沙拉嗪组IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α表达减少，IL-13表达增多，Occludin、Claudin-1、SOCS1蛋白表达及SOCS1 mRNA表达上调，p-JAK1、p-STAT6蛋白表达及JAK1、STAT6 mRNA表达下调（

＜0.05或

＜0.01）。与美沙拉嗪组比较，黄芪-败酱草高剂量组IL-6、IL-1β、TNF-α升高，IL-13表达降低（

＜0.05或

＜0.01），Occludin、Claudin-1蛋白表达，JAK1、STAT6、SOCS1 mRNA表达差异均无统计学意义（

＞0.05）。

结论

黄芪-败酱草药对可能通过JAK1/STAT6/SOCS1通路下调致炎因子表达，从而发挥抗炎、修复溃疡性结肠炎肠黏膜屏障作用。

Abstract

Objective

To explore the possible mechanism of drug pair Huangqi （

Radix Astragali

）

Baijiangcao （

Herba Patriniae

） in the treatment of ulcerative colitis （UC）.

Methods

After 24-hour intervention of 20 μg/ml lipopolysaccharide （LPS） on HT-29 cells， an inflammatory cell model was established. Huangqi & Baijiangcao at eight different concentrations （1.125， 2.25， 4.5， 9， 18， 36， 72， 144 mg/ml ） were used on the inflammatory cell model for 24 hours， and the cell viability was detected by CCK-8 method to obtain the top three for follow-up experiments. There were six groups including blank group， model group， mesalazine group and Huangqi & Baijiangcao low-， middle- and high-dose groups. After modeling， 100 μl of 1 mg/ml 5-aminosalicylic acid was given to the mesalazine group， and 100 μl of the obtained low， medium and high concentrations of Huangqi & Baijiangcao was given to the corresponding three Huangqi-Baijiangcao groups， respectively； 100 μl complete medium was used in the blank group and model group. All groups were intervened for 24 hours. The expression of inflammatory factors interleukin 13 （IL-13）， interleukin 6 （IL-6）， interleukin 18 （IL-18）， tumor necrosis factor α （TNF-α） and interleukin 1β （IL-1β） was detected by ELISA. The protein expression of Occludin， Claudin-1， phosphorylated protein tyrosine kinase 1 （p-JAK1）， phosphorylated signal transducer and activator of transcription 6 （p-STAT6）， protein tyrosine kinase 1 （JAK1）， signal transducer and activator of transcription 6 （STAT6）， and suppressor of cytokine signaling 1 （SOCS1） was detected by Western blot， and the mRNA expression of JAK1， STAT6， SOCS1 was detected by qRT-PCR.

Results

Finally， 2.25 mg/ml， 4.5 mg/ml and 9 mg/ml of Huangqi

Baijiangcao were obtained as low， medium and high concentrations. Compared to those in the model group， the expressions of IL-6， IL-1β， IL-18 and TNF-α decreased in high-dose Huangqi

Baijiangcao group and mesalamine groups， while the expression of IL-13 increased； the protein expression of Occludin， Claudin-1 and SOCS1， as well as the SOCS1 mRNA expression were up-regulated， while p-JAK1， p-STAT6 protein expression and JAK1， STAT6 mRNA expression were down-regulated （

＜0.05 or

＜0.01）. The high-dose Huangqi

Baijiangcao group had higher IL-6， IL-1β， and TNF-α， and lower expression of IL-13 than the mesalazine group （

＜ 0.05 or

＜0.01）， while no statistical differences in Occludin， Claudin-1 protein expression， JAK1， STAT6， and SOCS1 mRNA expression between the two group （

＞0.05）.

Conclusion

Huangqi & Baijiangcao may down-regulate the expression of inflammatory factors through JAK1/STAT6/SOCS1 pathway， thereby acting on the inflammation and repairing intestinal mucosal barrier.

关键词

Keywords

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